关键词:曝光;PVDF膜

    1)将膜稍微沥干液体后,平铺于干净的洗盒中,将ECL化学发光剂A液和B液各取1ml混匀后,用移液器汲取后均匀淋在PVDF膜表面,使其室温充分反应(约5min);

    2)将曝光暗盒的上下塑料膜用脱脂棉球清洗并擦干后,用眼科镊夹取PVDF膜转移至曝光暗盒下塑料膜上,盖上上塑料膜,并用脱脂棉球赶走PVDF膜和上塑料膜之间的气泡;

    3)在曝光暗室内,打开红外灯,将3-6张胶片比齐后紧贴上塑料膜,马上关好曝光暗盒。根据目的蛋白的荧光亮度决定曝光时间(5-30min);

    4)分别将显影液、定影液倒入不锈钢盘中,开曝光暗盒,马上取出胶片放入显影液中,待所有条带都显现出黑色条带时(1-5min),将胶片用自来水清洗后,再放至定影液中(1-5min),当胶片顺着红外灯背景比较透明时定影可以结束,将胶片在自来水下冲洗干净,回收显影液和定影液;

    5)将胶片放65℃烤箱中烤干,然后比对曝光暗盒中荧光标记条带的位置,在胶片上标记膜上蛋白质Maker;

    6)扫描胶片,保存图片和胶片,Image J App分析结果。

     

    6)PVDF膜的重复使用

    1)曝光完毕后,将PVDF膜用眼科镊夹取出,用0.5‰TBST快速冲洗一遍,然后在0.5‰TBST中放水平摇床上洗5min,倒入适量一抗二抗洗脱液摇床上洗15-30min;

    2)回收一抗二抗洗脱液(最多两次),0.5‰TBST快速洗膜一遍,然后0.5‰TBST洗膜5min*3;

    3)此时可重新用5%脱脂牛奶封闭1h,重新孵育之前的一抗或者另外的一抗,其余步骤同前。