摘要:【目的】明确介导前列腺素E2(PGE2)促进人CD34+细胞增殖的具体受体亚型。【方法】收集2013年6月至2014年lO月期间18例健康志愿者经G-CSF动员的外周血,采用免疫磁珠法分选人CD34+细胞,并用流式细胞术鉴定其纯度;用qRT-PCR检测经PGE2作用后的人CD34+细胞中PGE2四个亚受体(EPl~EP4)mRNA表达情况;根据处理方法不同,将人CD34+细胞分为对照组、前列腺素E2(PGE2)组、前列腺素E2受体EP2激动剂(EP2A)组、EP2A+前列腺素E:受体EP:拮抗剂(EP2AA)组、前列腺素E2受体EP4激动剂(EPA)组及EPA+前列腺素E:受体EP4拮抗剂(EP4AA)组,每组3例,分别接受上述组药物处理.采用集落形成实验检测红系集落形成单位CFU-E、红系爆式集落形成单位BFU-E、粒系集落形成单位CFU-G、单核系集落形成单位CFU-M、粒一单核系集落形成单位CFU-GM及粒、红、单核、巨核系集落形成单位CFU-GEMM集落形成情况:用流式细胞术检测细胞周期分布;用Realtime-PCR检测CD34+细胞内survivin-mRNA水平、Westernblot检测胞浆内β-catenin和survivin蛋白表达情况。【结果】人CD34+细胞可表达PGE:的四个亚受体,但主要表达受体EP2和EP4;PGE:作用后,EP2和EP4mRNA表达量较对照组明显升高,而EP2和EP3的mRNA表达变化不明显;EP4A可促进人CD34+细胞各系造血集落形成;E2可促进人CD34+细胞进入细胞周期,使G/M期比例增加;EP4A可促进凋亡抑制蛋白survivin的mRNA和蛋白表达、β-catenin蛋白表达。【结论】前列腺素E2体外主要通过受体EP4促进人CD34+细胞增殖。
   
   关键词:异基因造血干细胞移植;植入功能不良;PGE2受体;PGE2受体激动剂;增殖
   
   
   3讨论
   PGE2对造血的调控具有多向性。1970至1990年间大量的研究证实PGE2体外可抑制人和鼠CFU-GM形成,直接抑制粒系造。相反,PGE,可直接或间接通过T细胞释放的细胞因子促使BFU-E及CFU-GEMM形成。但是,Goessling等证实当PGE2作用于人脐血干细胞3h后可显著增强CFU-GM集落形成;Dupuis等证实PGE2作用于纯化的人外周血CD34+细胞后可增强粒系和红系造血祖细胞形成。这提示PGE2的作用时间及HSC的纯度在反应PGE2的造血调节效应中起着关键作用。大家的研究显示:当经磁珠分选后CD34+细胞达90%以上的细胞经PGE2和EP4作用24h后,各系造血集落的形成均增加;当E2被EP4A拮抗后,其促造血能力被抑制;EP4A对各系造血祖细胞的生成无明显影响。这说明PGE:可通过EP2促进各系造血集落形成。